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本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测谷物、饲料等样本中的玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）（又称F-2毒素），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。

检测时，加入标准品或样本溶液，样本中的玉米赤霉烯酮和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗玉米赤霉烯酮抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含玉米赤霉烯酮含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中玉米赤霉烯酮的残留量。

• 试剂盒灵敏度：0.3ppb(ng/ml)
  
• 反应模式：25℃，30min～15min
  
• 检测下限：
  谷物及其食品原料6ppb
  饲料及饲料原料18ppb 18ppb
  玉米皮、麦麸等吸水性强的样本
  
• 交叉反应率：
  玉米赤霉烯酮100%
  玉米赤霉酮13%
  玉米赤霉醇＜1%
  
• 样本回收率：
  谷物及其食品原料90%±15%
  饲料及饲料原料80%±15%
  玉米皮、麦麸等吸水性强的样本80%±15%

• 仪器：酶标仪、打印机、均质器、振荡器、离心机、恒温培养箱、天平（感量0.01g）
  
• 微量移液器：单道20μL～200μL、100μL～1000μL，多道300μL
  
• 试剂：甲醇

• 试剂盒各组份从冷藏环境中取出时，必须平衡至室温后，方可开封启用。未使用完的试剂组份应及时放回2～8℃密封保存。
  
• 试剂盒请在有效期内使用，拆开的试剂盒尽量在3个月内用完，以免拆开后保存不当失效。
  
• 试剂盒在使用过程中，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
  
• 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象，所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
  
• 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
  
• 试剂盒中有些组分具有腐蚀性或毒性，避免接触皮肤。
  
• 本方法为筛选方法，如遇阳性样本请用确证方法进行确认。
  
• 试验过程遇到任何问题，请与厂商联系。

• 样本处理前须知：
  实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。
  
• 配液：
  
  • 样本提取液：按V_甲醇∶V_去离子水＝9∶1比例配制成90%甲醇，即为样本提取液。
    
  • 工作洗涤液：将20×浓缩洗涤液20倍稀释(1份20×浓缩洗涤液加19份去离子水)。
• 样本前处理步骤：
  
  • 谷物（大米、玉米、小米等低脂含量）及其食品原料
    
    • 称取2g±0.05g粉碎样本于50mL离心管中，加入8mL样本提取液，振荡5min，室温4000r/min离心10min；
      
    • 取0.5mL上清，加入2mL去离子水，混匀；
      
    • 取50μL进行分析。
      稀释倍数：20，检测下限：6ppb
  • 饲料及饲料原料
    
    • 称取2g±0.05g粉碎样本于50mL离心管中，加入8mL样本提取液，振荡5min，室温4000r/min离心10min；
      
    • 取0.5mL上清，加入1mL样本提取液，混匀；
      
    • 取0.5mL混匀液体，加入2mL去离子水，混匀；
      
    • 取50μL进行分析。
      稀释倍数：60，检测下限：18ppb
  • 玉米皮、麦麸等吸水性强的样本
    
    • 称取2g±0.05g粉碎样本于50mL离心管中，加入24mL样本提取液，振荡5min，室温4000r/min离心10min；
      
    • 取0.5mL上清，加入2mL去离子水，混匀；
      
    • 取50μL进行分析。
      稀释倍数：60，检测下限：18ppb

• 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
  
• 加样反应：加标准品或样本50μL/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50μL/孔，再加入50μL/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30min。
  
• 洗涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加350μL工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
  
  • 用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破。
• 显色：每孔加入底物液A 50μL，再加底物液B 50μL，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15min。
  
  • 若蓝色过浅，可适当延长反应时间。
• 终止：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，终止反应。
  
• 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10min内完成。

• 百分吸光率的计算
  标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即
  

  百分吸光度值(%)＝	A	×100%
  	A0

  A：标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
  A₀：0ppb标准溶液的平均吸光度值
  
• 标准曲线的绘制与计算
  以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。